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免疫。 1999年2月、 96 （2） ：286〜290。
土井： 10.1046/j.1365-2567.1999.00696.x 。
PMCID： PMC2326734
著作権 © 1999ブラックウェルサイエンスは、株式会社
ソース http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2326734/
様々な動物からゼラチン、ウシゼラチンと小文字を区別子供の免疫グロブリンEの反応
のM坂口は、 *の Hの堀 † Tの海老原、 ‡ 、字入江 ‡ Mの柳田 § とイノウエ字 ¶を
免疫学教室、日本東京国立研究所の感染症、
¶ 感染症情報センター、日本東京国立研究所の感染症、
† 日本、部門の成人病、医学研究所、東京医科歯科大学、東京
‡ 東京、日本、ニッピ研究所Biomatrix
§ 薬開発研究所、キリンビール株式会社、群馬県
対応：博士昌宏坂口、免疫学教室、国立感染症研究所、富山1-23-1東京都新宿区162、日本。
受信1998年7月20日、改訂1998年10月25日、受理1998年10月25日。
この記事は、されている 引用 のPMCの記事他。
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抽象的な
それは報告されている安定剤として持つ抗ウシゼラチンIgEの牛ゼラチンを含むはしか、おたふく風邪、風疹ワクチンのアナフィラキシーを示したほとんどの子供たち。 本研究では、ゼラチンの間の抗原交差反応性は、様々な動物からゼラチン、ウシゼラチンと小文字を区別子供のIgEの反応性を調査するために設計されています。
血清サンプルでは、牛のゼラチンを含むワクチンのアナフィラキシーは、本研究で用いられており、10人の子供から取得されます。 これらの血清サンプル中の抗ウシゼラチンIgEのレベルは251のUA / mlの11.0からであった。 中のIgEは、子供たちのほとんどは、彼らが持っていたが食べ物やワクチンの安定剤としてほとんど、あるいは全く露出していたし、カンガルー、マウスゼラチンに反応した。
IgEはカンガルーとマウスゼラチンに結合相互抑制は抗原交差反応性は、哺乳類のゼラチンとの間に存在であることを示す、完全ではありませんでした一方、完全に、ウシゼラチンに抑制された。 ただ一つの子は、魚のゼラチンに強いIgEの反応性を持っていた、この反応はなかったは抗原交差反応性は、牛や魚ゼラチンの間に存在することを示す、ウシゼラチンに抑制された。 ウシゼラチンに対する感度が表示さ子供たちのほとんどは、
他の哺乳動物ゼラチンに対するIgE反応性を示した。 この反応は、主に哺乳動物ゼラチンの間の抗原交差反応に起因する可能性があります。
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はじめに
ワクチン。アナフィラキシー反応にはしか、おたふく風邪、風疹ワクチンと結合麻疹おたふく風疹（ているワクチンは）MMRが存在するタンパク質卵アレルギーに起因するとされて報告が示唆されてとての 1 ただし、アナフィラキシー反応が報告されているされてもタンパク質卵への耐性を示した子供いたのワクチン接種の管理を発生することが、次の。 2 - 6 ケルソー らを。ら 7は、 ゼラチンへの投与の報告、次のアナフィラキシーに苦しんで子供がその抗体を生産的IgEワクチンMMRの。
さらに、研究では、以前の 8 - 12 我々は、IgEをゼラチン-ライブがあるなどの表示全身即時型反応を子どもたちは、ほとんど発見したアナフィラキシー、、反不活化ワクチンを持っています。 我々は安定発生反応の全身性即時型ほとんどは、その信じているようにワクチンゼラチン存在するのが原因で後に接種。
ゼラチンとした免疫原性低されて信じて、長い人間のアレルギー弱さがあると思われる。 、ゼラチンをしています。ワクチンされての安定剤として使用される、広くその 13 日本で生産ワクチンで使用されるゼラチンは、ソースブタまたは導出するから牛、すべての生ウイルスワクチンは、ゼラチンが含まれている牛と、百日咳破傷風ジフテリア不活化ワクチンなどの無細胞と日本脳炎ウイルスのワクチンは、ゼラチンを含むいずれかの牛や豚。 ゼラチンは、動物多すべてのことができますが、本分子由来のコラーゲン。 14 、 15
本研究では、酵素免疫測定法（ELISA）とマスト細胞のヒスタミン遊離試験だけでなく、ELISA阻害によるゼラチンの間の抗原交差反応性によって様々な動物からゼラチンに牛ゼラチンと小文字を区別子供のIgEの反応性を検討した。
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材料および方法
子供
被験者は）女子構成されての10人の子供（6男子4（月、2年4平均年齢± SDは、± 1年）（示したワクチンを生きてアナフィラキシーは、 表1 ）。 これらの子供たちからの血清サンプルは、メーカーのワクチンによって参照して医師の病気の感染研究所した提出して日本代表。 抗ウシゼラチンIgE値は250 11日からであったのUA /）ミリリットル（平均値± SDは、51 ± 72のUA / mlの。
子供たちの10日6人がワクチン風疹いた受信はしかワク チン、三おたふく風邪ワクチン、および1。 （アナフィラキシーショックと低血圧および- ）血管虚脱またはこれらの子供たち4人の子供が苦しんだまたは喘鳴プラス喉頭気道閉塞（と浮腫の重篤なアナフィラキシー-蕁麻疹皮膚症状（全身））と6人がおよび/ または蕁麻疹全身苦しんで軽度のアナフィラキシーを、例えば、症状は他の喘鳴および/ または咳および/ または。 次の予防接種をアナフィラキシーの発症の時間が分に5〜30であったから。
表1
血清中のワクチンや抗ウシゼラチンIgE値にアナフィラキシー児
ゼラチン
ELISA法ゼラチンは、の最小10 · 100コラーゲンでネイティブ変性の後で使用した。 天然コラーゲンは、メソッド次のように調製したに従って。 ）サケウシガエルオタマジャクシやコラーゲンは、（ウシ、モルモット、ラット、マウス、ニワトリの種から脊椎動物、抽出酸m酢酸0.5準備から肌の真皮がされ、沈殿塩精製によって差。
16 種の動物のコラーゲンから無脊椎動物（サメ、タコは、回虫）ホモジネートされた真皮から同様に調製し、精製した。 17 識別および純度の評価）されたページ、日常的に達成でドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDSは。 18 コラーゲンや動物、他のゼラチンから購入した次の情報源：豚コラーゲン（新田ゼラチン、大阪、日本）;カンガルーとタラのゼラチン（Sigma Chemicals社、セントルイス、ミズーリ州）。
ゼラチン特異的IgEの測定
ファルマシアCAPシステム（ファルマシア、ウプサラ、スウェーデン）卵白と）和光純薬工業、大阪、日本和光ゼラチン（牛で使用したと判断濃度（UAは/ ml）のIgE抗体に。 8
からの様々な動物のゼラチンに対する抗体が特異的IgE分析ELISA法蛍光れた決定によって、前述のよう。
9 マイクロプレート）をミリリットル/したコーティングと様々な（5動物のゼラチンμgの。 ℃で4インキュベーションに続いて、一晩の血清サンプルをウェルにされたプレイリストに追加しました。 温度室温で3時間後、培養、抗ヒトIgE抗体）がファルマシア共役はとβ- D -ガラクトシダーゼ（追加されました。 酵素反応基質）は、シグマ化学0.2 mmol / lの4 -メチルウンベリフェリル-β- D -ガラクトシド（。 蛍光ユニットは（FU）に）商品であった測定を用いた蛍光、マイクロプレートリーダーを（Fluoroskan;フローラボラトリーマクリーン。
人間の肥満細胞
培養ヒトマスト細胞は、前述したように調製。 19 簡単に言うと、単核細胞は、血液臍帯臍帯得られたから）SCFの細胞因子（培養の最小幹の存在の組換えヒトでは、子牛の血清を胎児必須培地（MEM）を含む20％（は100 ng / ml）およびインターロイキン6（IL - 6の）（10 ng / mlと、キリンビール、群馬、日本）。 純度をするマスト％の細胞に達すると100は、彼らが実験に使用される。
培養マスト細胞からのヒスタミン遊離は、受動的な子供たちの血清と感作
肥満細胞からのヒスタミン遊離は、以前は次の記述されていたとして実施。 20 簡単に言えば、マスト細胞は）/ mlのngの100（洗浄三回のMEMを含むSCFを、37 IL - 6は、ngの/（10ml）を、で血清一晩インキュベートし、 °。 6時感は、SCFとIL -それぞれミリリットルngの/ 10、100新たに加えたとの文化で。
洗浄後に3つ、それらは分10のpH 7.4）を含む0.1％ウシ血清37）は、プレインキュベーションでミリリットルngの/ 10アルブミンでのSCFの存在（°であった（バッファのHEPESタイロード中断インチ 次に、細胞分30 5μg/ ml）を、抗ヒトIgEモノクローナル抗体（4μgの/（Chemicon社）を加え、テメキュラ、カリフォルニア州）37℃（様々なゼラチンとした挑戦した。 細胞ペレットの内容はヒスタミンでの上清と手続き蛍光自動化された決定による。 自発的放出は、抗体モノクローナルIgEの抗またはゼラチンの代わりにバッファされた評価のほかの。 された計算リリースのヒスタミン次のように割合は：
ゼラチン特異的IgEの抑制
ウシや他の動物のゼラチンとの間抗原交差反応性が阻害ELISAの蛍光した分析で見たによって、前述のよう。 21 簡単に言えば、ゼラチン（/ mlの5μg）を井戸をマイクロプレートに吸収された。 ℃で4インキュベートした後、一晩血清を阻害剤としてされた混合して抗ゼラチンIgEおよびゼラチン（100μg）を/ mlのウェルに追加します。 温度の部屋のインキュベーション時間後3、抗ヒトIgE抗体が追加されましたガラクトシダーゼ結合を有するβ- dは。 次の手順では、ELISA法上記蛍光上記したと同じ者によく見られます。 された計算阻害の次のように割合は：
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結果
IgEの反応性が他の動物からゼラチン
IgEのゼラチン-ウシ血清は、子ども10から示した抗高レベルの比較的アナフィラキシーをワクチンとした動物の他から分離してゼラチンIgEの反応性を分析していた使用されます。 表2 に示す分離からゼラチン血清中のIgE反応性13種類の動物。 値は、ゼラチンウシとしている比較してゼラチンの動物種々の結合のIgEの割合としてされたものです。
子供たちのほとんどは、ワクチンと不活化食品にされることがありますていたブタに対するIgE特定のゼラチン、。 また、ゼラチン、マウスやカンガルーなど、他の哺乳類IgE抗体はしてゼラチンから子供たちにその大部分の血清にあった検出公開されて決して彼らが持っていた。 興味深いことに、ただ一つの子）はタラとサーモン（魚から持っていた強いIgEの反応性をゼラチン。
表2
抗ゼラチンIgEの反応は様々な動物からゼラチン
ゼラチン固有のヒスタミン遊離
ゼラチン固有のヒスタミン遊離アッセイ（血清の子感の3つの細胞受動マストだった運ばから培養した 図1 ）。 3人の子供たちが（シャン3-5）IgEは牛のゼラチン抗いた比較的高レベルの。 子ども血清プール、マスト細胞は、血清またはその各感とリリースを示した牛のゼラチン固有のヒスタミン。
これらの子供たちが持っていた（ほとんど、あるいは全く抗ニワトリや抗サメゼラチンIgE値 表2 ）。 したがって、それらの血清で感作肥満細胞は、（リリースヒスタミンは表示ニワトリやサメゼラチン固有のでした 図1 ）。 コントロールとして正、-ヒトIgE抗肥満細胞が挑戦リリースを示したヒスタミン。
図1
肥満細胞からのヒスタミン遊離は、受動的牛のゼラチンと小文字を区別子供たちの血清で感作した。
ELISA法によるゼラチンの間で抗原交差反応性を阻害
反応性の間の哺乳動物ゼラチン-抗原クロス阻害ELISA法によるものについて検討した。 子供たちの血清（第1番、2および4）で 表2 分析したものである。
血清同牛のゼラチンとのインキュベーションの（％95抑制結合することにより、複数 図2aは ）。 IgEはゼラチン牛バインディングにゼラチン、マウスやカンガルーのいずれかだったが完全に抑制で（ 図2aは ）、完全な一方、相互された阻害が（ 図2bには、C ）。 同様のパターン）が示されていない間に牛抑制がわかったと（ゼラチンラットのデータ。 これらの結果は、ゼラチン、哺乳類やその他の反応性の間に牛のクロスを示すことがある抗原。
図2
ELISA阻害解析による哺乳動物ゼラチンの間の交差反応性は、ウシゼラチンと小文字を区別子供たちの血清を使用します。 （）固定化抗原：牛ゼラチンと、（b）固定化抗原：カンガルーと、（c）固相化抗原：マウスのゼラチン。
間の牛や魚ゼラチン反応は次に、クロス阻害ELISA法によるものについて検討した。 血清子供の（その1）誰が分析した両方の抗ゼラチン-ウシおよび抗魚に使用されるIgEをした。 IgEはゼラチン牛バインディングにゼラチンれた鮭のかどうか抑制で鱈（ 図3aを ）とは相反性抑制が観察された（ 図3bはと、c ）。 これらの結果は、ゼラチン、魚牛と交差反応性の間にはほとんど示すことがあります。 対照的に、（ゼラチンサケによるIgEの抑制結合を完全にされたとタラのゼラチンは、 図3bは 抑制された検出（逆数） 図3cは ）。 したがって、強力な交差反応性は、ゼラチン魚の間に観察されなかった。
図3
と小文字を区別子ゼラチン牛や魚の使用して血清を分析ELISA阻害による交差反応性の間に牛や魚ゼラチン。 （）固定化抗原：牛ゼラチンと、（b）固定化抗原：タラのゼラチンと、（c）固相化抗原：サケ （続きを読む...）
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討論
研究では、以前、我々は、IgEをゼラチンウシ子供たちが持っているほとんどのことがわかった抗いたゼラチンを含むウシワクチンを持っていたアナフィラキシーに住んでいます。 8 、 9 それは抗の存在にワクチンアナフィラキシーがあるということでしたが示唆された関係の間に強い-牛ゼラチンIgE値。
研究では現在、ヒスタミン遊離、特定のマスト細胞の感作される牛のゼラチンワクチンとアナフィラキシーを示していた子供たちから、各血清またはプール血清。 この結果は、感度ゼラチン牛やワクチンを再確認間の関係をアナフィラキシーと。
日本では、ウイルスのワクチンは、ゼラチンが含まれている唯一の牛住んでワクチンを不活化ゼラチンを含むいずれかの牛や豚。 研究では、以前、我々はにワクチンアナフィラキシーの子どもを示した血清中のゼラチンブタ評価し、牛に対するIgE応答を 9 研究では、この、我々は、他の哺乳動物ゼラチンに対するIgEを特定の測定し、発見した子どもたちのほとんど安定食べ物やワクチンとして露出していたほとんど、あるいは彼らが持っていた-ブタ、マウス、ラット、どのなしていた特定のモルモット、などのカンガルー哺乳類的IgEをゼラチンから他の。
ゼラチン、これらの反応の間で、可能性を抗原クロスに調べるために、の血清子供のELISA阻害を行った。 IgEはゼラチン牛バインディングに完全に他の哺乳動物だった阻害は、一方の相互ゼラチンによるもので阻害を完全には。 これらの結果は、構造が抗原を示すことがクロス一般的なことが共有するゼラチンは、哺乳動物が反応は意味が存在する中で哺乳動物ゼラチン。
本研究では、我々はニワトリや魚などの非哺乳動物からゼラチン特異的IgEを測定した。 子供たちのほとんどは、これらのゼラチンに弱いかは反応していた。 また、アンチエイリアスなしニワトリまたはノー抗サメのゼラチンIgEがいた血清で感作肥満細胞は、対応するヒスタミン遊離を示した。
ただ一つの子は（その1）魚のゼラチン特異的IgEの高レベルを持っていた。 この子の血清は、ELISA阻害によって分析したが、牛や魚ゼラチンの間にはほとんど交差反応性があることが示された。 現在のところ、日本ではワクチンが利用可能な魚ゼラチンが含まれていません。 しかし、魚の肉や皮膚が、そこからゼラチンが得られるコラーゲンを含んでおり、それは子供が食品中の魚ゼラチン感作になることがあります可能性があります。
この子は、魚アレルギーに関する情報が利用可能でしたが、彼は（データは示されていない）CAPの方法により抗タラを、抗サケ肉のIgEていた。
結論として、ウシゼラチンの感度を持つ子どもはまた、他の哺乳動物ゼラチン特異的IgEを持っていた。 哺乳類のゼラチンの中抗原の交差反応性があり、哺乳動物や魚のゼラチンは、交差反応を示すのに対し。 一人の子どもが抗ウシゼラチンIgEの独立していた魚ゼラチン、強いIgEの反応性を示した。
謝辞
我々は、医師や血清サンプリングで彼らの助けのためのワクチンメーカーのスタッフに感謝します。
用語集
Appreviations
ELISA法 酵素免疫測定法
FUの 蛍光ユニット
MEMの 最小必須培地
MMRの 複合麻疹おたふく風疹ワクチン
NTの テストされていません
SCFの 細胞因子幹
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参照
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